常见问题解答

HE染色与常见问题分析

定义

苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

常见问题

一.着色过深或者过浅

1.染色时间控制不佳，HE染色需要通过镜检来控制时间，可以先通过预实验得到最佳染色时间，一般情况下新鲜苏木素染色时间在1-3min左右，分化时间同样不易过长，过度分化可以水洗后重新复染苏木素。

二.染色后切片不清晰，雾化，斑点

1.烤片温度过低，时间不够，导致脱蜡不彻底，切片留存白色斑点，

2.染色后切片脱水时间不合理，切片上残留水分，使切片雾化，需要优化脱水的梯度乙醇时间，切片经过低浓度时时间要短，向高浓度逐渐延长脱水时间

3.盖玻片上残留封固剂，导致切片不清晰，需要重新封片解决

4. 组织标本已发生自溶或取材后没及时固定或固定液浓度不够；另固定前干枯标本，染色后易出现灰染现象，很难补救。

5. 固定剂对组织有一定媒染作用，它既可与蛋白结合又能与染料结合，可增强着色能力，同时能沉淀和凝固细胞内成分，使细胞内成分产生不同折光率造成光学差异。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因。

6. 在日常病理制片中淋巴结处理不当造成切片染色后组织见发灰现象，其主要原因由于细胞密集，结构复杂导致固定液难以渗透到组织深部，从而造成组织中央固定不佳，而出现彻底发灰现象。可用等量无水乙醇乙醚混合液处理切片5-10分钟，乙醇洗，水洗，3%硫酸铁铵溶液补充媒染5分钟既可。

三.染色后切片有黑色杂质，气泡

1.杂质多为苏木素染色液中的金属膜粘附于载玻片上，每天染色前仔细过滤苏木素染液或者使用半氧化苏木素染色液

2.染色后切片经过梯度乙醇脱水不彻底，导致封片后载玻片上残留水分，也可能是封片是出现的气泡

四.染色后细胞核呈棕色

1.苏木素染液过度氧化或者染色后返蓝时间不足，染色前检查苏木素的染色能力并即时更换试剂，然后适当延长返蓝时间

五．切片染色不匀

1. 组织取材固定不当，如组织取材过大或过厚，不能将组织完全固定，组织切片染色后出现外周固定好的部分易着色，而中间未固定好的组织 ，细胞着色模糊，使染色不均。在送检的标本中，及时用4%中性甲醛对标本固定，固定液应是标本的4倍。大标本应切开固定。

2. 切片薄厚不均或有横纹。切片刀有缺口时，易造成断裂，破碎和不完整。切片刀倾角过大上卷，不能连在一起，过小则切片皱起。或因螺丝松动产生振动切片易造成厚薄不均或技术人员手臂摇动切片机头力量不均易造成横纹。切片时检查切片机螺母是否拧紧。

3. 组织脱水，透明和浸蜡处理不当，组织脱水用的各级乙醇未能保证相应浓度使组织脱水不彻底，二甲苯内的时间过长组织易碎也无法切出好片子，浸蜡温度过高，组织变脆也不利切片染色。

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