药效学实验中心

改善骨密度功能的动物试验评价方法

1 测试项目：

动物试验：分为方案一（供试物以钙为主）和方案二（其他与骨代谢有关的功能成分，如内分泌调节）不含钙或不依赖钙的供试物有两种方案2仅适用于每日钙摄入量小于100mg的供试品，方案1适用于其他供试品。

1.1 方案一：对幼鼠生产发育的影响

断奶大鼠约4周龄，体重约60-75g，同性别，每组8-12只。适应3-5天后，动物禁食16小时，称重，按体重随机分组，分笼饲养。给动物喂食基础低钙饮食并自由饮水（去离子水以避免饮用水中的钙）。饲养期为4周。 ，每周测量一次体重和体长，记录一周的食物摄入量，计算食物利用率；实验结束时，取双侧股骨，在105℃烘箱中烘烤至恒重，称取骨干重。右侧测量骨钙，左侧测量骨矿物质密度，取股骨或肱骨进行骨病理学检查。

1.2 方案二：对去势性骨质疏松模型大鼠的影响

实验动物为Wistar或SD雌性大鼠，约300g，实验前适应1周。麻醉下进行去势，切除双侧卵巢；选择另一部分大鼠进行类似手术，不切除双侧卵巢，仅切除部分脂肪。术后将大鼠适应性饲养3-5天，然后分组。实验动物按体重随机分组，每组至少10只。测试样品每天给药一次。动物可以自由获取水和基础饲料。喂养期为12周。实验结束时，取大鼠双侧股骨进行测量。测定股骨干重、骨钙含量、骨矿物质密度和骨组织病理学。

1.3 钙吸收代谢实验：

4周龄左右断奶的SD大鼠，体重约60-80克，同性别，每组至少6只。适应3-5天后，将大鼠分别在单独的笼子中饲养4周。每周测量一次长度和重量。用低钙对照组的基础低钙饲料（150mg/100g饲料）配制各剂量的受试物组和碳酸钙对照组。动物随意喂食，每周称量动物食物消耗量以计算食物利用率。动物随意饮用去离子水。实验进行到第四周的前三天，进行钙代谢实验，记录3天的摄食量（g/3d），收集3天的粪便，测定钙含量在饲料和粪便中测定。测定方法采用原子吸收分光光度法测定。

钙摄入量（mg/d）=饲料中钙含量（mg/g）×饲料消耗量（g/d）

粪便钙（mg/d）=粪便中钙含量（mg/d）g）×粪便排泄量（g/d）

钙表观吸收率=（钙摄入量-粪钙）/钙摄入量*100%。

2 实验原理：

2.1 根据被测样品作用原理的不同，可选择方案一和方案二中的一种进行动物试验。

2.2所列指标均为必填项。

2.3 如果样品中含有未经批准用于食品的含钙化合物，必须进行钙吸收和代谢试验；该样本使用了营养强化剂范围内的钙源和来自普通食物（如食用动物的骨头）的钙源。 、牛奶等），可能无法进行钙吸收和代谢测试。

3 结果判断

3.1 方案一：

a) 至少一项生长发育指标（体重、身长、股骨干重）明显高于低钙对照组；

b) 股骨骨钙含量或骨密度显着高于低钙对照组，无论是病理（骨组织学还是钙沉积）均优于低钙对照组；

如果满足以上要求，则可以确定受试物具有“有助于增加骨密度的功能”的作用。

3.2 方案二：

受试物试验组股骨骨钙含量或骨密度明显高于模型对照组，骨组织形态学指标较去势模型对照组有明显改善。只有这样才能确定受试物质具有“有助于增加骨密度的功能”的作用。