江苏省南京市栖霞区和燕路371号 东南大学国家大学科技园科创楼A301
自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型
一、实验材料
MOG35-55(吉尔生物,51716)
CFA(sigma,F5881)
百日咳素(sigma,P7208)
二、实验方法
1、抗原乳化:1mg/ml的CFA和1mg/ml的MOG35-55混合乳化,利用三通管排出注射器中的空气,冰上来回交替推动活塞 30 min,抗原呈完全乳化状态。
(也可使用高速搅拌器,4℃搅拌2min,3-5次)
2、完全乳化的抗原使用1 ml注射器分装,排除内空气后保存于冰上。
3、百日咳素(PTX)的稀释:用 1×PBS以 1:25稀释 PTX至终浓度2ug/ml。
4、小鼠尾静脉(i.v.)注射PTX,100ul/只小鼠 。
5、小鼠气麻后,用酒精棉球消毒小鼠前肢肩胛骨与后扇部位的皮肤,皮下注射 MOG35-55抗原乳化液于该四点处,每处 50μl。
7、48 h后,每只小鼠再次尾静脉注射 100 μl PTX。
8、模型诱导首天记为Day 0,每天统计小鼠体重,观察评分 。
评分标准:
评分 | 临床体征 | 具体表现 |
0 | 无临床症状 | 正常步态,尾巴可以移动并抬起,如果将鼠标固定在尾巴底部, 尾巴会缠绕在圆形物体上 |
1 | 部分软尾 | 正常步态,尾端下垂 |
2 | 瘫痪的尾巴 | 正常步态,尾巴下垂 |
3 | 后肢轻瘫,运动不协调 | 步态不协调,尾巴跛行,后肢对挤压有反应 |
4 | 一条后肢瘫痪 | 步态不协调,一条后肢拖拉,尾巴跛行,一条后肢对挤压没有反应 |
5 | 两条后肢瘫痪 | 步态不协调,双后肢拖拉,尾巴跛行,双后肢对挤压没有反应 |
6 | 后肢瘫痪,前肢无力 | 步态不协调,前肢用力拉扯身体,前肢在挤压后反射,尾巴跛行 |
7 | 后肢瘫痪,前肢瘫痪 | 老鼠不能移动,一个前肢对脚趾挤压做出反应,尾巴跛行 |
8 | 后肢瘫痪,前肢瘫痪 | 老鼠不能移动,两个前肢对脚趾挤压没有反应,尾巴跛行 |
9 | 垂死的 | 没有动静,呼吸迟缓 |
10 | 死亡 |
三、实验结果