药效学实验中心

增强免疫力功能动物实验评价方法

1.实验原理

免疫系统主要包括中央和外周淋巴器官、淋巴组织和遍布全身的淋巴细胞、抗原提呈细胞等，还包括血液中的白细胞。胸腺是一个中央淋巴器官，其主要功能是保证T淋巴细胞的产生和成熟。外周淋巴器官包括血液、淋巴管和免疫活性细胞;脾脏对抗原有免疫反应。脾窦内的巨噬细胞具有清除功能。脾的白髓含有记忆B细胞，并对t依赖抗原产生体液免疫反应。

淋巴细胞是特异性免疫反应的主要细胞群。根据其表面标记，淋巴细胞可分为T细胞、B细胞和自然杀伤细胞(NK)。T细胞又可分为CD4+ (Th)细胞和CD8+T淋巴细胞。B淋巴细胞转化为浆细胞后可合成并释放抗原特异性抗体。免疫系统可产生特异性和非特异性免疫功能。

检测免疫系统各种代表性指标的变化，可以确定增强免疫作用的功能。

2. 试验项目

2.1动物选择

建议使用近交系小鼠，如C57BL/6J、BALB/ C等，6-8周龄，18-22g (BALB/ C物种16-18g)，单性别，雌雄各10-15只。

2.2动物实验

2.2.1重量

2.2.2器官/体重比测定:胸腺/体重比、脾脏/体重比

2.2.3细胞免疫功能测定:cona诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验、二硝基氟苯诱导迟发性过敏试验(DTH)

2.2.4体液免疫功能的测定:抗体产生细胞和血清溶血素

2.2.5单核和巨噬细胞功能测定:小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

2.2.6 NK细胞活性测定

3.结果测定

3.1采用正常动物实验，检测样品具有增强免疫力的作用。在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性四个方面，如果其中任何两个方面的检测结果均为阳性，则可判断该检测样品具有增强免疫的作用。其中，两个实验测量细胞免疫功能的结果均为阳性，说明细胞免疫功能检测结果为阳性。两组实验的体液免疫功能试验结果均为阳性，说明体液免疫功能试验阳性。单核巨噬细胞功能测试项目中两个实验结果均为阳性，单核巨噬细胞功能测试结果均为阳性。如果超过一个剂量的NK细胞活性试验结果为阳性，则确定NK细胞活性结果为阳性。正常动物实验需要四方面的测定。

3.2采用免疫缺陷动物实验，样品可增强免疫缺陷者的免疫功能。在建立免疫缺陷模型的条件下，血液白细胞计数、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性5个方面的任何2个检测结果均为阳性，确定该检测样品对免疫缺陷人群具有增强免疫力的作用。细胞免疫功能试验项目中两个实验结果均为阳性，或任意两个剂量组实验结果均为阳性，可确定细胞免疫功能试验结果为阳性。两组实验均阳性即为体液免疫功能试验结果阳性，或任意两剂量组实验均阳性即为体液免疫功能试验结果阳性。若单核巨噬细胞功能测定项目中两个实验结果均为阳性，或任一实验中两个剂量组的结果均为阳性，则可判断单核巨噬细胞功能试验结果为阳性。如果超过一个剂量的NK细胞活性试验结果是阳性的，可以确定阳性的NK细胞活性结果。如果两种或两种以上剂量的血白细胞总数结果均为阳性，则可确定血白细胞总数结果为阳性。

在免疫缺陷模型的动物实验中，至少需要进行三次测量。

在所有的试验中，没有任何一项试验使免疫抑制剂的效果恶化。