药效学实验中心

辅助降糖功能评价动物实验方法

1 实验项目
1.1 正常动物降糖实验
选择健康成年动物，按空腹3-5小时血糖水平分组，随机选择1个对照组和1个剂量组。对照组给予溶剂，剂量组给予高剂量浓度测试样品连续30天测量空腹血糖值（空腹与实验前相同），比较两组动物。
1.2 高血糖模型降血糖实验
1.2.1 胰岛损伤高血糖模型
1.2.1.1 原理：四氧嘧啶（或链脲佐菌素）是一种细胞毒剂，可选择性地损伤一个物种的多个胰岛细胞，导致胰岛素分泌低，引起实验性糖尿病。
1.2.1.2 建模方法
购买成年动物，适应1天后，随机选择15只动物禁食3-5小时，测定空腹血糖作为该批动物的基础血糖值。然后将动物禁食24小时（自由饮水）并注射四氧嘧啶（使用前新鲜制备）建立模型，小鼠45-50 mg/kg BW.iv，50-80 mg/kg BW.iv老鼠。 5-7天后，动物禁食3-5小时，测量血糖。血糖水平为10-25 mmol/L，是成功的高血糖动物模型。选取高血糖模型动物，按空腹3～5小时血糖水平分组，随机选取1个模型对照组和3个剂量组（组间差异不大于1.1 mmol/L）。剂量组给予不同浓度的试验样品，模型对照组给予溶剂连续30天测量空腹血糖值（空腹与实验前相同），比较血糖值，百分比各组血糖下降，并进行糖耐量试验。
1.2.2 地塞米松诱导的胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型
1.2.2.1 原理：糖皮质激素可拮抗胰岛素的生物学作用，抑制靶组织对葡萄糖的摄取和利用，促进蛋白质和脂肪的分解和糖异生，糖异生导致糖脂代谢紊乱，胰岛素抵抗，诱导实验糖尿病。
1.2.2.2 试验方法：购买健康雄性大鼠（15020g)，正常维持日粮适应喂食3-5天，禁食3-4小时，采尾血测空腹前(0小时)、2.5g/kg BW后血糖水平葡萄糖，测量0.5和2小时的血糖值，作为该批动物的基准值。根据0、0.5小时血糖水平分为5组，即1个空白对照组、1个模型对照组和3个剂量组，每组15只大鼠。空白对照组不做任何处理，三个剂量组灌胃不同浓度的试验样品，模型对照组连续35天给予相同体积的溶剂。每组喂食维持饲料。 1周后，模型对照组和3剂组换成高热量饲料。喂养2周后，模型对照组和3剂组在高热量饲料的基础上给予地塞米松0.8mg。 /kgBW腹腔注射，每天一次，连用10-12天。试验结束时，各组动物禁食3-4小时，检测空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素、胆固醇和甘油三酯水平。
1.2.3 四氧嘧啶诱导的胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型
1.2.3.1 原理：在高热量饲料的基础上，辅以低剂量四氧嘧啶，会引起糖/脂代谢紊乱，胰岛素抵抗，诱发实验性糖尿病。
1.2.3.2 造模方法：购入健康雄性大鼠（15020g），适应普通维持物喂养3-5天，禁食3-4小时，取尾血，葡萄糖给药前（即0小时）测量。以2.5g/kg BW葡萄糖给药后0.5和2小时的血糖值作为本批动物的基础值。根据0、0.5小时血糖水平分为5组，即1个空白对照组、1个模型对照组和3个剂量组，每组15只大鼠。空白对照组不做任何处理，三个剂量组灌胃给予不同浓度的供试品，模型对照组连续给予等体积溶剂33天。每组喂食维持饲料。 1周后，模型对照组和3个剂量组换成高热量饲料。喂食3周后，模型对照组及3剂禁食24小时（禁水），给予四氧嘧啶103 -105mg/kg BW腹腔注射，注射量1ml/100g 体重。注射后3-5天继续喂高热量饲料。实验结束时，各组动物禁食3-4小时，检测空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素、胆固醇和甘油三酯水平。
2 实验原理
2.1 动物实验和人体食品试验所列指标均为强制性项目。
2.2 根据被测样品作用原理的不同，可选择方案1和方案2的动物模型中的一种进行动物实验。
2.3 高血糖模型动物除检测所列指标外，还应观察供试品对正常动物空腹血糖的影响。
3 结果的确定
3.1 动物实验：
方案一：若空腹血糖和糖耐量两项指标之一为阳性，且对正常动物的空腹血糖无影响，则可判定供试品有助于降低血糖功能性动物的结果实验是积极的。
方案二：若空腹血糖和糖耐量两项指标之一为阳性，血脂（总胆固醇、甘油三酯）无明显升高，对正常动物空腹血糖无影响，则供试品可确定辅助降糖功能的动物实验结果为阳性。